Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Оптическая плотность раствора 1 г/л нуклеиновой кислоты при длине волны 260 нм равна 20.
2.5.18. ФОСФОР В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ
Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5 мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема. Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до объема водой Р. Разводят раствор так, чтобы объем, используемый в опыте (1 мл), содержал около 6 мкг фосфора. Переносят 1,0 мл раствора в пробирку на 10 мл из термостойкого стекла.
Стандартные растворы. 0,2194 г калия дигидрофосфата Р разводят в 500 мл воды Р таким образом, чтобы концентрация раствора была равна 0,1 мг/мл фосфора. 5,0 мл раствора разводят до 100,0 мл водой Р. Переносят 0,5 мл, 1,0 мл и
2,0 мл разведенного раствора в три пробирки из термостойкого стекла. Готовят контрольный раствор, используя 2,0 мл воды Р в пробирке из термостойкого стекла.
Во все пробирки добавляют 0,2 мл кислоты серной Р и подогревают на масляной бане при 120 C в течение 1 ч, а затем при 160 C до появления белого дыма (около 1 ч). Прибавляют 0,1 мл кислоты хлорной Р и нагревают при 160°C до обесцвечивания раствора (около 90 мин). Охлаждают и прибавляют в каждую пробирку 4 мл воды очищенной и 4 мл реактива аммония молибдата Р. Нагревают на водяной бане при 37 C в течение 90 мин и охлаждают. Доводят объем до 10,0 мл с помощью воды Р. Голубой цвет остается стабильным в течение нескольких часов.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны 820 нм, используя контрольный раствор в качестве раствора сравнения. Строят градуировочный график на основе оптической плотности трех стандартных растворов и соответствующей концентрации фосфора и сравнивают с оптической плотностью исследуемого раствора.
2.5.19. О-АЦЕТИЛ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ
Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5 мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема. Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до необходимого объема водой Р. Раствор разводят так, чтобы объемы, используемые в опыте, содержали от 30 мкг до 600 мкг ацетилхолин хлорида (О-ацетил). Помещают 0,3 мл, 0,5 мл и 1,0 мл по два раза в 6 пробирок (3 реагирующих раствора и 3 корректирующих раствора).
Стандартные растворы. Растворяют 0,150 г ацетилхолин хлорида Р в 10 мл воды Р (основной раствор, содержащий 15 г/л ацетилхолин хлорида).
Непосредственно перед использованием разводят 1 мл основного раствора до 50 мл водой Р (рабочая концентрация 1 - 300 мкг/мл ацетилхолин хлорида).
Непосредственно перед использованием разводят 1 мл основного раствора до 25 мл водой Р (рабочая концентрация 2 - 600 мкг/мл ацетилхолин хлорида). Помещают 0,1 мл и 0,4 мл рабочей концентрации 1 дважды (реагирующий и корректирующий растворы) в 4 пробирки и 0,6 мл и1,0 мл рабочей концентрации 2 дважды (реагирующий и корректирующий растворы) в другие 4 пробирки.
Готовят контрольный раствор, используя 1 мл воды Р.
Доводят объем в каждой пробирке до 1 мл водой Р. Добавляют 1,0 мл 4 М раствора кислоты хлористоводородной в каждую из корректирующих пробирок и в контрольную пробу. Добавляют 2,0 мл щелочного раствора гидроксиламина Р в каждую пробирку. Дают пройти реакции в течение 2 мин и добавляют в каждую из
пробирок с реагирующим раствором 1 мл 4 М раствора кислоты
хлористоводородной. Прибавляют 1,0 мл раствора 100 г/л железа хлорида Р в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной в каждую пробирку, закрывают пробирки пробками и сильно встряхивают для удаления пузырьков.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны 540 нм, используя контрольный раствор в качестве раствора сравнения. Для каждого реагирующего раствора вычитают оптическую плотность соответствующего корректирующего раствора. Строят градуировочный график на основании скорректированных оптических плотностей для 4 стандартных растворов и соответствующего содержания ацетилхолин хлорида и сравнивают с графиком содержание ацетилхолин хлорида в исследуемом растворе для каждого исследуемого объема. Рассчитывают среднее по трем величинам.
1 моль ацетилхолин хлорида (181,7 г) соответствует 1 молю О-ацетила (43,05
г).
2.5.20. ГЕКСОЗАМИНЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ
Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5 мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема. Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до объема водой Р. Раствор разводят таким образом, чтобы объемы, используемые для опыта, содержали от 125 мкг до 500 мкг глюкозамина (гексозамина). В градуированную пробирку вносят 1,0 мл разведенного раствора.
Стандартные растворы. 60 мг глюкозамин гидрохлорида Р растворяют в 100 мл воды Р (основной раствор, содержащий 0,500 г/л глюкозамина). Помещают 0,25 мл, 0,50 мл, 0,75 мл, и 1,0 мл рабочей концентрации в 4 градуированные пробирки.
